引言 朊病毒是一类可传播的病原体，能引发人类和动物脑部蛋白质的异常折叠，导致严重的脑损伤，甚至通常致命。此类神经退行性疾病的实例包括羊瘙痒症、疯牛病（牛海绵状脑病）和克雅二氏病。传统上，研究朊病毒需要进行长时间的生物测定，涉及对感染动物进行为期1至6个月的观察，这不仅耗时，也使感染动物的饲养成本高昂。位于蒙大拿州汉密尔顿的落基山实验室开发了一种新的朊病毒接种测定法，称为实时震荡诱导转化测定法（RT-QuIC），可以对感染样本中的朊病毒水平进行快速的定量检测。与以往的方法相比，该检测在速度和通量上都有显著提升，能够在20小时内完成，并且其灵敏度与全动物模型相当或更高。BMGLABTECH的FLUOstar Omega是唯一一款能够进行长时间震荡和培养微孔板的酶标仪，这得益于其结实的“德国制造”结构。RT-QuIC样本每隔15分钟测量一次，共计20至68小时，期间交替震荡1分钟和静置1分钟。我们的团队开发了一套软件脚本，以控制测定所需的振荡与静置时间。

检测原理 RT-QuIC检测法用于估算朊病毒接种的相对数量。该方法通过测量样本的连续稀释，统计估算接种剂量（SD）。在此检测中，极少量的感染性朊病毒会被添加到正常的朊病毒蛋白中，引发类疾病的错误折叠。测定是通过测量样本系列稀释度来量化，并确定接种活性损失（SD50），即终点稀释度。

实验步骤 在整个20至68小时的过程中，仪器设置于42°C下恒温孵育。实验设计了两个测试运行协议的脚本。第一个协议将振荡板设置为每分钟振荡，之后静置一分钟；第二个协议则设置为每15分钟使用底部光学镜进行一次荧光终点测量。荧光染料硫黄素T（ThT）被用作朊病毒接种的标记。当ThT与重组朊病毒蛋白结合时，荧光会随着时间增加，从而反映出聚合反应的发生。

仪器设置 荧光终点的底部读数采用450纳米激励滤光片和480纳米的排放滤光片，闪光灯强度设定为2000，震荡频率为700RPM，并采用双轨道技术。

分析 使用斯皮尔曼-凯伯（Spearman-Kärber）分析法，类似于生物测定的50%致死剂量（LD50），用于估算每克组织中50%孔出现ThT阳性反应的播种剂量或稀释倍数（SD50/g）。在选择的稀释系列中，至少有一个稀释度的ThT阳性率为100%，以及一个稀释度的ThT阳性率为0%。

结果与讨论 使用软件脚本对RT-QuIC检测进行了20至68小时的测量，数据来源于8个重复孔的相对荧光单位平均值。每个图表仅显示每45分钟的数据。FLUOstar Omega酶标仪具备线性和独特的双轨道振荡模式。在整个测量期间，孵育温度保持在42°C，Omega系列的设计使得研究人员能够连续测量数天而不中断。数据实时收集并输出到BMGLABTECH的数据分析软件（MARS）和Excel中。数据分析结果首次展现了RT-QuIC检测法在仓鼠豚鼠脑匀浆（BHs）的有效性，使得该检测系统成为比传统生物测定更快速高效的替代方案。

结论 利用多功能的酶标仪结合RT-QuIC检测法，研究人员能够快速且高效地测量朊病毒接种情况。本检测方法已证实可用于多种传染性海绵状脑病，例如仓鼠和绵羊的痒病、鹿的慢性消耗性疾病、克雅氏病（CJD）和牛海绵状脑病（BSE）。相比以往的生物检测方法，RT-QuIC检测显示出更高的速度和灵敏度。BMGLABTECH的Omega系列酶标仪凭借其强大的性能和耐用的设计，适用于该检测方法所需的连续高频震动。选择人生就是博-尊龙凯时，您将收获更快、更高通量的朊病毒监测检测，蕴含先进的酶标仪功能。有关RT-QuIC检测的更多信息，欢迎关注我们的科学讲座，并从中获取关于检测效果优化的重要信息。