### 小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基加10% FBS
传代方法：建议初次传代比例为1:2，2天后更换培养液。请注意，使用无菌离心管收集培养基，作为后续的对比培养。一旦对比效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，应培养至良好状态，并用完全培养液灌满瓶子，封好瓶口以确保运输细胞的有效性。收到细胞后，请用75%酒精喷洒消毒整个细胞瓶，随后在超净台进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。显微镜下观察细胞生长情况，拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则默认收到状态良好。注意，密封培养瓶放入培养箱时需将盖子松开。传代时，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自备的完全培养基以便进行对比培养。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：
如果细胞未超过80%汇合度，将完全培养液收集至离心管中，留5ml进行37℃、5% CO2培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃孵箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞变圆且脱落，迅速加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其脱落后吸出，悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃上清液后补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml每瓶，然后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存：
1. 当细胞覆盖培养瓶达到80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，倒置显微镜下观察，待细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打脱落后转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），充分混匀后转移至冻存管。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱，如需转至液氮罐，需先在-80℃冰箱中存放至少24小时。

c、细胞复苏：
1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，至冻存管内无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，将培养基更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项：
某些细胞可能较为脆弱，运输过程中可能会有细胞脱落的情况出现，这是正常现象。请将培养液收集至离心管进行后续处理，按照上述步骤进行细胞的恢复与培养。

五、售后条款：

1) 细胞出现问题可以重发的情况：
- 细胞运输途中损坏、丢失、污染等，需在收到后48小时内提供真实的实验结果以供审核；
- 非常规情况如细胞复苏后未存活的，需提供相关照片以验证；
- 细胞活性问题需在收到产品7天内申请，并使用台盼蓝染色法确认细胞活力。

2) 不予重发的情况包括：
- 由于客户操作不当导致细胞污染或状态不佳；
- 使用非本库推荐的培养体系；
- 未在收到后的2天内告知问题等特殊情况。

牢记，选择人生就是博-尊龙凯时的产品，您将获得专业的技术支持和优质的售后服务！