实验室培养的细胞根据细胞类型大致分为三类：

细胞类型分类

（1）贴壁细胞： 细胞粘附于培养容器（如组织培养塑料）。

（2）悬浮细胞： 所有细胞都在生长培养基中悬浮，不附着在培养容器上。

（3）半贴壁细胞： 部分细胞松散地附着在培养容器上，而其他细胞则可能悬浮于生长培养基中。

细胞生长特性分类

细胞还可以根据其生长特性划分为有限增殖和无限增殖：

有限增殖： 仅增殖并维持有限数量的群体倍增活力，此类细胞通常是从组织中直接分离的原代细胞或在传代次数达到一定后停止生长的细胞系。

无限增殖： 具有无限分裂能力的细胞（即永生化细胞），通常通过转化产生，表现出相似癌症的表型，例如失去接触抑制及无限生长。

本文将重点讲解最为常见的细胞类型：贴壁细胞和悬浮细胞。同时，请确保在操作培养细胞时采用无菌技术和合适的控制方法。

第一阶段：冷冻保存

由于细胞在持续培养中会积累遗传不稳定性，接收到细胞系后应尽快进行冷冻保存，以确保细胞库的遗传特性尽可能接近源材料，并降低污染风险。冷冻过程应在使用冷冻保护剂（如DMSO）时，以可控方式（理想情况下以每分钟1°C的速度）进行，以防止细胞内冰晶的形成，确保细胞活力。

实验步骤

1. 使用显微镜观察细胞状态，确保没有微生物污染的迹象，同时确认细胞处于对数生长期，细胞密度不超过指导范围，活力应大于90%。

2. 按照标准传代培养方法收集并计数细胞。悬浮细胞以每毫升2-5×10⁶个细胞的密度进行冻存，贴壁细胞以每毫升1-2×10⁶个细胞的密度进行冻存。

3. 根据细胞系特点选择合适的冷冻保护剂，并计算所需冷冻液的量，按照配方配置冷冻液。注意添加DMSO时需提前配置。

4. 以200×g离心细胞悬液5分钟，去除上清，重新将细胞沉淀物悬浮于PBS中。

5. 再次以200×g离心5分钟，去除上清。

6. 用配置好的冷冻液重悬细胞沉淀，充分混匀后转移至冻存管，标记日期、细胞类型等重要信息。

7. 将冻存管置于冻存盒中，在-80°C下冷冻一夜，以控制温度降低。

8. 最后将其转移到液氮罐中以进行长期储存。

第二阶段：细胞复苏

复苏细胞时，应尽快解冻，以减少对细胞活力的不利影响。建议在复苏时通过离心去除冷冻保存剂。

实验步骤

1. 从液氮储存中取出冷冻管，放入37°C水浴中，轻轻摇晃管子加速解冻。当内部细胞解冻至黄豆大小时，将其取出。

2. 将1ml细胞转移至装有4ml预热培养基的15ml离心管中，以200-250×g离心5分钟。

3. 去除上清液，用适量预热培养基重新悬浮细胞沉淀，然后接种至相应培养容器中进行培养。

4. 根据细胞需求添加生长因子等成分。

第三阶段：观察

定期用显微镜和肉眼观察细胞是否有污染迹象，并检查细胞的整体健康状况，以判断是否需要传代培养。

实验步骤

1. 观察细胞状态，排除污染风险。对于贴壁细胞，培养基应清澈。如不清澈，则可能是污染迹象或细胞过度生长。对于悬浮细胞，若培养基过于浑浊，可能表示细胞密度过高或存在污染。

2. 在显微镜下确认细胞是否贴壁、细胞形态及融合度（贴壁细胞），确保其生长状态符合预期。对于悬浮细胞，通过细胞计数监测细胞密度，必要时进行传代培养。

注意定期检查细胞，排除支原体及其他微生物污染的可能性。

第四阶段：细胞维持和传代培养

当细胞达到所需的汇合度时，可以进行传代培养；若未达到，需更换培养基并继续观察。

更换培养基

定期更换培养基以防止代谢物积累，确保细胞健康。通过pH指示剂监测细胞培养基的变化。

实验步骤

1. 吸取生长培养基。对于悬浮细胞，离心去除培养基；对于贴壁细胞，倾斜培养容器略微吸出培养基。

2. 添加新鲜培养基，对悬浮细胞进行重悬，对贴壁细胞在容器内直接加入新鲜培养基。

3. 将培养容器放入培养箱，并继续监测细胞的生长情况。

传代培养

当细胞达到所需的汇合度或密度时，需进行传代培养，将细胞转移至新培养容器中，加新鲜培养基以促进继续生长。

实验步骤

1. 清洗并收集细胞。悬浮细胞通过离心清洗，贴壁细胞采用消化酶处理。

2. 根据适宜比例选择稀释传代，接种新容器中，并添加适量新鲜培养基。

3. 在培养容器上标注关键信息（细胞类型、传代次数、接种密度等），并按要求进行培养。

4. 持续监控细胞生长与污染情况。

如需了解更多产品详情，请访问人生就是博-尊龙凯时官网查询。