在生物医学研究中，**药物-药物相互作用（Drug-drug interaction, DDI）** 乃至影响患者安全的一个主要因素，可能导致严重的不良反应或甚至死亡，因此对DDI的可能性、严重性及其影响进行科学评估显得尤为重要。**细胞色素P450酶（Cytochrome P450, CYP450）** 是体内关键的药物代谢酶，其介导的药物相互作用评估通常涉及代谢表型研究、酶诱导和抑制作用评估。目前，CYP450酶的抑制作用主要分为可逆性抑制（Reversible Inhibition）和时间依赖性抑制（Time-dependent inhibition, TDI）。特别是TDI因其可能引发更为严重的用药安全问题，受到监管机构及药物研发者的日益重视。

**一、 CYP酶介导的时间依赖性抑制的介绍**

CYP酶介导的抑制作用是指某些化合物抑制特定CYP450代谢酶的活性，可能导致联合用药时某些药物的代谢减慢、清除率降低以及暴露量增加，从而引发安全隐患。TDI常表现为药物经过CYP酶的代谢产物与酶建立共价键，造成酶不可逆性失活。与可逆性相对，TDI的抑制效应不会在去除抑制剂后立即消退，而呈现毒性随时间累积的特性。

例如，著名的抗高血压药物米贝拉地尔（mibefradil）因其对CYP3A4的不可逆抑制作用，使与其联合使用的其他药物血药浓度显著升高，最终导致患者出现严重不良反应，甚至死亡。这一案例不仅突显了TDI对患者健康的风险，也给制药企业带来了巨大的挑战与风险，因此在药物开发过程中进行TDI评估显得至关重要。

**二、 TDI的体外试验评估**

在进行时间依赖性抑制评估时，常采用人肝微粒体作为体外孵育系统。目前主流的TDI评估方法包括**Single-point法**、**IC50位移法（IC50 shift）**和**Kinact/Ki法**。每一种方法都有其特定的试验设计和评价指标。

1. **Single-point法**：设计简单，通常使用一个或两个浓度（如1μM/10μM）进行预孵育，以评估相对剩余活性。 评价标准：相对剩余活性 < 80% 提示存在潜在的TDI风险。

2. **IC50位移法**：测试不同浓度的抑制剂及探针底物，在+/-NADPH预孵育30分钟后测定IC50值。相对精准的评估可帮助进行粗略的DDI预测。 评价标准：IC50位移 ≥ 15，提示存在TDI。

3. **Kinact/Ki法**：通过时间点设置与多个底物浓度的结合，提供更为精准的DDI预测。结合临床PK数据，计算R2值以评估其临床意义。

**三、 IPHASE在TDI评估中的贡献**

作为体外研究生物试剂的领先者，**IPHASE**采用IC50位移法验证不同抑制剂对人肝微粒体CYP3A4酶的时间依赖性抑制作用。通过液相-串联质谱（LC-MS/MS）分析代谢产物，提供严格的数据分析以确定药物的安全性和有效性。

**四、 IPHASE相关产品**

药物相互作用的研究对新药研发至关重要，特别是CYP酶介导的时间依赖性抑制作用评估。在此背景下，IPHASE凭借多年研发经验，提供多种种属的高质量肝微粒体产品，支持研究人员进行精确的药物相互作用评估。我们的产品包括人、猴、犬、大鼠、小鼠等多种动物的肝微粒体，适用于各种研究需求。

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