ELISA（酶联免疫吸附测定，Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）自1971年由Engvall等人首创以来，逐渐成为生物医学研究中不可或缺的工具。这一技术基于免疫组化中的酶免疫分析方法，通过固相免疫测定形式，有效检测体液中的微量生物标志物。在免疫荧光和放射免疫技术之后，ELISA以其独特的优势迅速崛起，成为临床检验和生物医学研究的重要工具。
ELISA的基本原理
ELISA是一种高灵敏度的免疫反应实验技术，其基本原理是利用抗原与抗体的特异性反应，结合酶对底物的高效催化作用，以检测靶蛋白的含量。实验过程中，将抗原或捕获抗体包被于固相载体上，通过酶或荧光基团将化学信号转化为电信号，以OD值或发光值进行靶蛋白的定量分析。
ELISA的分类
ELISA可用于检测抗原和抗体，通常按照实验原理和操作方式分为四类：直接法、间接法、夹心法和竞争法。
1. 直接法（Direct ELISA）
直接法通过将抗原或抗体固定到酶标板上，加入标记有酶的一级抗体或一级抗原，特异性结合后再利用酶催化底物显色，以测定总靶标蛋白的含量。
2. 间接法（Indirect ELISA）
间接法通常用于检测抗体。该方法通过将抗原固定到酶标板上，加入特异性的一抗，再加入标记有酶的二抗，最后加入底物以显色，来测定总靶标蛋白的含量。
3. 夹心法（Sandwich ELISA）
夹心法适用于检测具有多个识别位点的大分子蛋白。其分为双抗体夹心法和双抗原夹心法。双抗体夹心法通过将抗体固定在固相载体上来特异性捕获待测抗原，再利用酶标抗体进行检测；双抗原夹心法则反向应用，通过固相抗原和酶标特异性抗原来检测样品中的抗体。
4. 竞争法（Competitive ELISA）
竞争法适用于检测只有一个识别位点的小分子物质。标本中的抗原与一定量的酶标抗原竞争结合固相抗体，抗原含量越多，与固相结合的酶标抗原越少，显色强度越低。显色结果与待检抗原成反比。
四种ELISA方法的比较
| 方法分类 | 间接法 | 直接法 | 夹心法 | 竞争法 |
|---|---|---|---|---|
| 适用性 | 常用于临床诊断中的标志性抗体检测 | 实际运用较少，仅限于酶标记分子的检测 | 适合检测具有多个识别位点的大分子蛋白 | 主要用于小分子抗原如激素和药物的测定 |
| 优势 | 保留更多免疫反应性，高灵敏度，经济 | 步骤少，检测速度快，降低错误 | 高灵敏高特异性，可应用于不纯样本 | 适用于特定小分子，检测灵敏 |
| 劣势 | 交叉反应概率高，步骤较多 | 灵敏度低，背景较高，检测对象有限 | 对抗体要求高，交叉反应需优化 | 整体特异性与敏感性较差 |
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