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实时荧光定量PCR结果解析—人生就是博-尊龙凯时助力生物医疗常识分享

发布时间:2025-03-14   信息来源:翁璧固

校正染料(ROX)在生物医药领域中对校正加样误差或孔间误差起到了重要作用,能够提供稳定的基线,大幅提高定量实验的精确度,并增强重复实验的结果重现性。不同仪器对ROX的需求可能存在差异,因此在实验设计时需特别留意。

实时荧光定量PCR结果解析—人生就是博-尊龙凯时助力生物医疗常识分享

在基线PCR的初始几个循环中,荧光信号一般会保持在一个相对稳定的状态,此时的阈值代表可相信的最小荧光值。CT值则是扩增曲线与阈值交点的横坐标。当进行实验结果的有效性判断时,考虑融解曲线的单峰特征以及扩增曲线的指数扩增区域,复孔间CT值的标准差(STD)应小于0.2,以确保阈值的合理设置。此外,阈值需位于指数增长期内,尽管仪器会自动计算阈值,但在某些情况下,手动调整可能是必要的。

在进行无模板对照(NTC)时,如果证实不存在气溶胶污染,即ΔCT=NTC(CT值)-目的基因(CT值)≥3或≥5,可以认为实验结果的准确性不受影响。同时,通过无逆转录对照(NRT)确认基因组残留的可能性也是一种有效的方法,若ΔCT=NRT(CT值)-目的基因(CT值)≥3或≥5,同样可以判断系统中的基因组残留对结果的影响不大。

待测CT值需在线性范围内,且扩增效率接近于标准的PCR扩增效率(e)应保持在90%-120%之间,以确保实验的可靠性。我们,作为人生就是博-尊龙凯时的代表,致力于为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力成为基因治疗和细胞治疗的领先生物科技企业。总部位于广州的我们,能够为全国的科研人员提供最新的专业资讯和完善的服务,包括产品和物流支持。

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