原代细胞在转染小分子RNA和DNA(如siRNA、antisense RNA和microRNA)方面展现出良好潜力,能够有效地处理200bp以内的核酸。这使得原代细胞成为生物医学研究中的一个重要工具,且能广泛应用于绝大多数类型的原代细胞。尽管目前的市场上缺乏真正有效的商品化转染试剂,但核酸转染的研究依然是国内外的一个热点领域。
得益于先进的转染技术,我们如今能够在原代细胞中获得良好的基因敲除效果,甚至在一些活体寄生虫幼虫的转染中也能取得令人满意的结果。使用RFectPM细胞转染试剂,针对大部分原代细胞的阳性转染率超过80%,而转染过程中的细胞死亡率则低于10%。
原代细胞分离和培养的基本步骤
以下是原代细胞从提取到培养的一系列基本步骤:
1. 器官和组织的选择
尽量去除不必要的组织和血迹,以确保获得高质量的原代细胞。
2. 原代细胞的分离
(1)可使用PriCells原代细胞分离试剂盒I、II、III进行细胞分离。
(2)根据组织来源的不同,选择合适的PriCells试剂盒以达到最佳效果。
3. 原代细胞的培养
(1)采用PriCells专用培养基进行细胞培养。
(2)添加PriCells特制的培养添加物。
(3)使用优质胎牛血清以促进细胞生长。
4. 细胞的培养和鉴定
可借助PriCells原代细胞鉴定试剂盒进行细胞的鉴定。
5. 原代细胞的传代和保存
(1)传代时,根据细胞的生长状况,按照1:2或1:3的比例进行传代。
(2)保存细胞时,以DMSO、培养液和血清为基础,按顺序进行降温处理:从室温→4℃(20分钟)→冷冻室(30分钟)→超低温冰箱(-80℃过夜)→液氮保存。
6. 原代细胞的复苏
(1)将冷冻细胞迅速从保存中取出,放入37℃水浴中解冻。
(2)吸取细胞悬液,加入10倍以上的培养液稀释。
(3)经过适当稀释后,将细胞接种至培养瓶中,放入37℃的CO2培养箱中进行静置培养。
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