人恶性黑色素瘤细胞WM115培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞WM115

生长特性：贴壁

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2进行传代

备注：如需进行对比培养，建议保留部分细胞培养基；如果对比培养效果不理想，请考虑直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

为确保细胞运输安全，收到细胞后将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口是最佳选择。使用75%酒精对细胞瓶表面进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放置在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后进行处理。请使用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数的拍照保存（建议包括40x, 100x, 200x各一张）。请注意，前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

在细胞未超过80%汇合度时，收集瓶内的培养液并置于离心管中，保留5ml完全培养基，置于37℃、5% CO2培养箱中。如果细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞情况，若细胞大部分变圆并脱落，立即停止消化，加入5ml以上完全培养基。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入到37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，使用PBS洗涤细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，倒置观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟。
3. 弃上清后，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如需转入液氮罐，须在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶，再用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟。
3. 弃上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能因贴壁不牢而出现脱落，这属正常现象。若脱落较多，可将培养液收集至离心管进行后续处理。处理过程如需使用胰酶，请轻柔操作，确保细胞适度消化后重悬。

五、售后条款

1）细胞问题的重发情况

1. 在运输途中遭遇细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等问题可重发。
2. 细胞污染问题需在收到48小时内提供真实实验结果，经确认后可重发。
3. 常温发货细胞静置24小时后，若发现细胞存活率低，也可重发，需提供细胞状态照片。
4. 出现污染问题，需在特定条件下申请重发。
5. 细胞活性问题需在7天内提出，采用台盼蓝染色法确认。

2）不予重发的情况

1. 客户自行造成的细胞污染不予重发。
2. 不当操作导致细胞状态不良不予重发。
3. 使用非推荐培养体系造成的细胞状态不佳不予重发。
4. 未提供细胞培养前三天的照片不予重发。
5. 收到后2天内未及时告知问题，视为接受产品状态。