MatrixGel 是一种从小鼠肉瘤组织中提取的可溶性基底膜,包含多种细胞外基质蛋白,如层粘连蛋白(糖蛋白)、IV型胶原、巢蛋白(糖蛋白)及基底膜蛋白聚糖(硫酸乙酰肝素蛋白聚糖)和必需生长因子。这种基底膜已广泛应用于干细胞培养、血管生成实验及组织工程等生物医学领域。
细胞源异种移植模型
细胞源异种移植(CDX)模型是用于评估抗癌疗法的标准方法。利用免疫缺陷动物建立的异种移植模型,其药物反应与临床实践高度一致,成为肿瘤学研究中的一个可靠工具。本指南将验证 MatrixGel 在促进裸鼠细胞源异种移植瘤形成中的有效性。
MatrixGel 的使用方法
MatrixGel 可按需从 -20/-80℃ 解冻并分装,所有操作需在冰上进行,并使用预冷的枪头及离心管。要减少冻融次数,建议将其分装为一次性使用的小份。注意:与 MatrixGel 接触的所有耗材或培养基需提前冷却至冰上温度,解冻后的 MatrixGel 会在超过 10℃ 的温度下迅速凝固。
实验过程
- 在植入前3天,将细胞接种于10cm培养皿(05×106细胞/皿)。
- 在植入前1天更换培养基(DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 青链霉素),保持培养基的新鲜以确保细胞活性。
- 使用胰酶消化细胞,随后用 PBS 清洗3次,计数后重悬于 PBS(1×107细胞/mL)。细胞悬液的总体积需根据实验所用小鼠数量进行调整。
- 按每只小鼠 15 mL 离心管的比例,将 60 μL 细胞悬液与 60 μL MatrixGel 混合(细胞与基质的体积比为1:1)。在使用过程必须保持低温,确保混合物不凝固。
麻醉与注射
- 通过异氟烷吸入麻醉小鼠,操作过程中确保小鼠体温并监测其呼吸,需遵循 IACUC 规程控制异氟烷剂量。
- 用 70% 乙醇对注射部位消毒3次。
- 使用21-25G针头将混合液皮下注射到小鼠体内,避免细胞损伤。
观察与记录
- 每日观察小鼠健康状况。
- 每周三次使用游标卡尺测量肿瘤尺寸,并记录小鼠体重,直到肿瘤体积达到 1,000-1,500 mm³(实验终点需根据研究目标调整)。需记录肿瘤的长径、短径及高度。
- 根据实验需求在适当的时间给予药物处理。
处死与样本处理
- 采用 CO₂ 窒息法处死小鼠,呼吸停止后持续通入 CO₂ 至少 1 分钟,然后实施颈椎脱位,需遵循 IACUC 规程进行操作。
- 用 70% 乙醇清洁肿瘤区域。
- 小心切开皮肤并剥离肿瘤,置于无菌管中并于冰上保存。
- 收获的肿瘤可以进一步用于染色和表征分析。
通过以上步骤,可以有效利用人生就是博-尊龙凯时推出的 MatrixGel 进行实验。确保每一步操作的规范性,不仅有助于获得良好的实验结果,还可为后续的生物医学研究奠定基础。